nanodrop是基于吸光值来计算核酸浓度。nanodropone是一种超微量分光光度计,在进行测dna时,出现浓度相差大的情况,是因为nanodrop是基于吸光值来计算核酸浓度,当核酸里面有污染时,浓度就会相差很大。
这个情况确实时有发生,浓度太低的时候就可能有负值,厂家没有直接解释,一般就是让你开机后等半小时以上,机器热平衡后再测,样品也最好平衡到室温再测,温度的变化也会有影响。或者是检查空白对照是否有问题,比如换换比色皿什么的。
现在利用紫外分光光度仪测出来的DNA和RNA的浓度应该是比较准的了,利用琼脂糖凝胶电泳检测后也可以对dna和RNA的浓度进行定量分析,但是比较费时间,有条件的实验室都开始用紫外分光光度仪测DNA和RNA的浓度了。
在260nm下测定其吸光值。注意,这是紫外。计算:DNA的质量浓度(mg/L)= 50×A260nm 原理:核酸分子中的嘌呤碱和嘧啶碱由于碱基共轭双键的作用,具有强烈的紫外吸收,最大吸收值在260nm处。不能再具体了吧,虽然很简单,但已经够用啦。
1、邻二氮菲(1,10-Phenanthroline)分光光度法是一种常用于测定铁离子(Fe2+和Fe3+)浓度的分析方法。这种方法基于邻二氮菲与铁离子形成的络合物的形成常数,以及该络合物的吸光度与铁离子浓度之间的关系。
2、使用更精确的仪器和方法:如果常规的分光光度法无法满足高浓度铁样品的测定要求,可以考虑使用更精确的仪器和方法进行测定。例如,可以使用原子吸收光谱法、电感耦合等离子体发射光谱法等高精度的方法进行测定。
3、显色剂用量不足:邻二氮菲作为显色剂,与铁离子发生显色反应。如果显色剂用量不足,会导致反应不完全,使得铁离子浓度测量偏低。因此,应确保显色剂用量充足,使铁离子与显色剂充分反应。测量波长选择不准确:在分光光度法中,测量波长的选择对实验结果具有重要影响。
4、因为含铁的溶液中其它的物质也有吸光度,会影响铁的吸光度的测定,所以要排除这部分溶液的影响,用到参比溶液,就是含铁溶液中的没有待测物的溶液。
5、邻菲啰啉分光光度法测定铁含量的原理,在pH=2~9的溶液中,邻二氮菲与2价亚铁离子(Fe2+)发生显色反应,该反应的选择性很高,而且生成的橙红色络合物非常稳定,lgK稳=23(20℃),其溶液在510nm(可见光)有最大吸收峰,利用此显色反应,可以用可见光分光光度法测定微量铁。
6、邻二氮菲分光光度法测定铁实验是目前普遍***用的一种测定方法。
先用标准葡萄糖试剂(可在试剂门市部买到),用蒸馏水配成已知的标准溶液(一般配0.5%、1%、3%、5%、7%五个浓度的溶液即可),分别在分光光度计上(最好465微米处)测定光密度(吸光度)。
葡萄糖(也有用白砂糖的)的旋光特性和浓度成线性关系。beta = K * L * p (+ alpha)对于不均匀液体,有 beta= 积分号 K * p(L)dL L是光线通过溶液的长度。p是溶液浓度,一般认为是均匀的。K是旋光系数,要通过已知数据来反算的。
大致是先做一个不同浓度梯度的葡萄糖溶液的透光度数据表。
先把标准品的浓度和每个标准品的吸光度用Excel生成标准曲线,同时得到公式。测量每个样本的吸光度。把吸光度代入公式,计算出对应的浓度.如果样本有稀释,还要乘以稀释倍数。DNA及RNA含量测定方法:取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到lml。用lml水做空白。把样品杯放在分光光度计比色槽上。
** 将待测样品的吸光度与标准曲线上的吸光度相对应的浓度进行比较,从而计算出待测样品中待测成分的浓度。标准曲线法的关键在于建立一个准确、可靠的标准曲线,并通过测定待测样品的吸光度,利用标准曲线进行浓度的计算。这种方法通常用于分析中,如分子吸收光谱、原子吸收光谱等领域。
你说的这个很笼统,用分光光度计举个例子吧。首先用已知的一系列成浓度梯度的已知溶液,用光度计在最大吸收波长下测出吸光度,做出标准曲线,这样,标准曲线就是 该物质的 浓度值和吸光度的关系了。
计算样品的吸光度。 分析结果:根据样品吸收的光强计算出吸光度后,可以使用相关计算公式和标准曲线将数据转换成目标化合物的浓度。最后,对吸光度测量结果进行分析,并得出结论。总之,分光光度计是一种用于测量化合物浓度的非常有用的化学工具,通过这些步骤,可以准确测量样品***定的化学物质的浓度。
测定待测样品:将待测样品与适当的显色剂反应,生成有色物质。然后,使用分光光度计测定待测样品的吸光度值。查找吸光度值:在标准曲线上查找与待测样品吸光度值相对应的浓度。这个浓度即为待测样品中目标组分的浓度。需要注意的是,标准曲线和溶液浓度的选择对吸光度值的准确性具有重要影响。
另外,即使在550nm波长处进行测量,也不能保证样品的吸光度在该波长处完全符合朗伯-比尔定律。不同样品对光的吸收有其独特的特征,可能存在偏离朗伯-比尔定律的情况。因此,直接测定样品的浓度可能会产生误差。综上所述,为了准确测定样品的浓度和标准量,建议使用标准品进行校准和参照。
放置5h后,在分光光度计上,于波长550nm处测量吸光度。绘制校准曲线。分析步骤 称取0.1~0.2g(精确至0.0001g)试样置于铂坩埚中,加1mL(1+1)H2SO4,摇匀,再加10mLHF,轻轻摇动溶液,放置10min。移至电炉上低温加热,待试样分解完全后,蒸发溶液至冒三氧化硫白烟。
在分光光度计上,用lcm比色皿,以水为参比溶液,用不同的波长,从430~570nm,每隔20nm测定一次吸光度,在最大吸收波长处附近多测定几点。然后以波长为横坐标,吸光度为纵坐标绘制出吸收曲线,从吸收曲线上确定进行测定铁的适宜波长(即最大吸收波长)。
以试剂溶液作参比,用1cm比色皿,在λ=440~560nm处每间隔10nm测定00 Mg2+标准液的吸光度,从吸收曲线上找到 。
关于光度计测量浓度,以及光度计是测什么的的相关信息分享结束,感谢你的耐心阅读,希望对你有所帮助。
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