光度计测试吸光度的原理

接下来为大家讲解光度计测试吸光度的原理，以及光度计测试吸光度的原理和方法涉及的相关信息，愿对你有所帮助。

简述信息一览：

• 1、如何测定吸光度?
• 2、分光光度计的原理
• 3、分光光度计原理
• 4、分光光度计只能测出有色溶液的吸光度?为什么?
• 5、紫外-可见分光光度计

如何测定吸光度?

我们的实验是这样做的，首先先测甲基橙在酸性，碱性条件下的吸收曲线。可以找出酸性最大吸收波长λa 碱性最大吸收波长λb两条吸收曲线有一个交点，这就是等吸点λe。然后按一定的梯度配置一系列溶液，分别用酸和碱定容。用酸定容的在波长λa测吸光度，做工作曲线。

需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“100”点，然后再测量。指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上，不是这种情况，需进行机械调零。比色皿使用完毕后，立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。

其中A是样品吸收的特定波长的光线量， 是摩尔吸光系数， l是光线通过溶液的距离，而c是吸收物质单位体积的浓度。物质的浓度为1mol·L-液层的厚变为1cm时，溶液的吸光度。通常配制低浓度的溶液，测得A后，通过计算求得ε。

标准曲线的绘制 用100ml的容量瓶配制浓度分别为50mg/L、100mg/L、150mg/L、200mg/、250mg/L的甲基橙溶液备用。

将波长设为280和260，用石英比色皿零管校准零点，直接测定试样在这两个波长处的吸光度（Abs），仪器具体操作参照说明书。

首先要配制标准的过氧化氢酶溶液，比如准确配制0.1mol/L，然后取5ml，10ml，15ml，20ml，25ml的标准过氧化氢溶液，用50ml容量瓶稀释到刻度，然后分别测这五个溶液的吸光度，根据过氧化氢酶浓度c和吸光度A可以得到一个线性关系，得到线性曲线就是其吸光度的标准曲线。

分光光度计的原理

1、分光光度计的原理是：基于物质对光（对光的波长）的吸收具有选择性，不同的物质都有各自的吸收光带。分光光度计，又称光谱仪，是将成分复杂的光，分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200～380 nm的紫外光区。

2、分光光度计的基本工作原理是基于物质对光（对光的波长）的吸收具有选择性，不同的物质都有各自的吸收光带。所以，当光色散后的光谱通过某一溶液时，其中某些波长的光线就会被溶液吸收。在一定的波长下，溶液中物质的浓度与光能量减弱的程度有一定的比例关系，即符合比尔定律。

3、分光光度计原理大致是***用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光线透过测试的样品后，部分光线被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

分光光度计原理

～25μm（按波数计为4000cm-1～400cm-1）的红外光区。仪器 紫外分光光度计，可见分光光度计（或比色计）、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。

分光光度计***用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光线透过测试的样品后，部分光线被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

实验原理 分光光度计原理：分光光度计是一种通过测量物质对光的吸收程度来确定物质浓度的仪器。在分光光度计实验中，通常使用一束特定波长的光照射待测溶液，然后测量光的透射率或吸光度，从而得到待测物质的浓度。显色剂的作用：显色剂是一种能够与待测物质发生化学反应并产生颜色变化的物质。

分光光度法原理如下：分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。它具有灵敏度高、操作简便、快速等优点，是生物化学实验中最常用的实验方法。许多物质的测定都***用分光光度法。

分光光度计只能测出有色溶液的吸光度?为什么?

1、利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质的存在（定性分析），或利用物质对一定波长光的吸收程度来测定物质含量（定量分析）的方法，称为分光光度法。检测仪器 仪器分类 依据光谱区，分光光度计可分为：紫外分光光度计，可见分光光度计（或比色计）、红外分光光度计。

2、吸光光度法的方法原理：吸光光度法是借助分光光度计测定溶液的吸光度，根据朗伯一比耳定律确定物质溶液的浓度。吸光光度法是比较有色溶液对某一波长光的吸收情况。吸光光度法特点：①灵敏度高：一般吸光光度法所测定的下限可达10-5~10-6mol/L，因而有较高的灵敏度，适用于微量组分的分析。

3、、分光光度法的原理基于朗伯一比尔（Lambert - Beer）定律，在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到与不同波长相对应的吸收强度。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法。

4、分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。它具有灵敏度高、操作简便、快速等优点，是生物化学实验中最常用的实验方法。许多物质的测定都***用分光光度法。

5、紫外-可见分光光度法在190～800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定。当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。

紫外-可见分光光度计

在实际操作中，可以通过扫描样品的紫外可见光谱图来确定合适的波长。通过观察光谱图可以找到一个既能使被测物质有较大吸收，又能尽量避免干扰的波长。此外，还可以根据实验目的、样品性质以及文献资料等信息来指导选择合适的入射光波长。

分光光度计的基本工作原理 随着现代科技的不断发展和进步，现代分光光度法的测试手段和方法都在不断改进，但最根本的依据仍然建立在朗伯-比尔定律的基础之上。

紫外——可见分光光度计用于定量分析的基本方法是：用选定波长的单色光照射被测物质的溶液，测量它的吸光度，再根据吸光度计算被测组分的含量。测量的理论依据是“光吸收定律”，即朗伯——比耳定律，当一适当波长的单色光照射吸光物质的溶液时，其吸光度与吸光物质浓度和透光液层厚度的乘积成正比。

紫外可见光光度计操作规程内容如下：方法一：打开紫外可见分光光度计电源开关。检验吸收池的成套性。选择工作波长（按紫外可见分光光度计设定键，以及增加、减小按钮，进行设定）。选择测量方式（按方式键选择透射比模式与吸光度模式）。润洗比色皿，依次装入参比溶液和测量溶液。

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