文章阐述了关于分光光度计标准管吸光度,以及分光光度计的管的信息,欢迎批评指正。
首先分光光度计使用前要预热15分钟(一般是,设备型号不同可能有所区别)然后注意调零。
分光光度计是一种精密的测量仪器,使用时需要注意以下几点事项:防止光电管疲劳、正确拿取比色皿、比色皿的液体容量、对照调零、更换溶液时的盖子、保持比色皿清洁。防止光电管疲劳:在不测定时,应将试样室盖打开,使光路切断,以延长光电管的使用寿命。
分光光度计的使用方法 预热仪器:为使测定稳定,将电源开关打开,使仪器预热20min,为了防止光电管疲劳,不要连续光照。预热仪器时在不测定时应将比色皿暗箱盖打开,使光路切断。选定波长:根据实验要求,转动波长调节器,使指针指示所需要的单色光波长。
要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1~5A。样品不能存在气泡,空白液无悬浮物,否则读数漂移剧烈;必须使用相同的比色杯测试空白液和样品,否则浓度差异太大;不能***用窗口磨损的比色杯;样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等。
【紫外可见分光光度计使用注意事项】在使用紫外可见分光光度计时,必须要注意一些使用后的维护、保养,和一些基本使用注意事项,才能达到更好的使用效果。使用的吸收池必须洁净,并注意配对使用。量瓶、移液吸管均应校正、洗净后使用。
光源——单色光器(波长调谐旋钮)——液槽(选择拉杆)——测量显示系统。新仪器注意把表头接线柱上的短路片取下,使用中接通电源后随即把液槽盖板打开,以防光电管长时间照射性能降低,调谐波长时一定要缓慢,测量吸光度时要注意选取适宜的区段,既不能太小也不能太大。
1、根据朗伯比尔定律得出:当一束平行单色光通过一定液层厚度的有色溶液时,由于溶质吸收了光能,光的强度就会减弱。溶液浓度越大,液层越厚,入射光越强,光被吸收的就越多。如果用公式表示的话,就可以表示为表示为:A=E*C*L(A为吸光度,C为溶液浓度,L为液层厚度)。
2、先把标准品的浓度和每个标准品的吸光度用Excel生成标准曲线,同时得到公式。测量每个样本的吸光度。把吸光度代入公式,计算出对应的浓度.如果样本有稀释,还要乘以稀释倍数。DNA及RNA含量测定方法:取5ulDNA样品或4ulRNA样品加水到lml。用lml水做空白。把样品杯放在分光光度计比色槽上。
3、标准曲线通常是一条过原点的直线,被测组分含量可从标准曲线上求得。以分光光度计法为例,某特定波长的光经过某物质,可以被该物质吸收、反射等,并且其浓度(c)与吸光度(A)之间在一定浓度范围内符合朗伯-比尔定律。
4、可以用标准曲线法来测定。首先配置不同浓度的氨水溶液,其加入比率按0:1:2:3:4:5来配比。具体浓度根据你想测得样品来决定。
5、** 将待测样品的吸光度与标准曲线上的吸光度相对应的浓度进行比较,从而计算出待测样品中待测成分的浓度。标准曲线法的关键在于建立一个准确、可靠的标准曲线,并通过测定待测样品的吸光度,利用标准曲线进行浓度的计算。这种方法通常用于分析中,如分子吸收光谱、原子吸收光谱等领域。
由比耳定律可知,单色光辐射穿过被测物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比。又由物质的对光谱的选择吸收性可知,同一物质对不同波长的光吸收程度是不同的。故与液层的高度无关。
仪器问题:分光光度计是测定吸光度的重要仪器,如果仪器本身存在问题也可能导致实验结果异常。例如,比色皿的清洁度、仪器波长准确性、光源的稳定性等都可能影响吸光度的测定结果。如果仪器问题导致吸光度测量不准确,则可能使吸光度接近0。
吸光度值与测定浓度不成直线关系,发生向下弯曲(负偏离)或向上弯曲(正偏离)的现象而偏离朗伯一比尔定律的主要原因如下。(1)非单色光的影响紫外一可见分光光度讣使用连续光源和分光器分光,不可能得到真正理想的单色光;为保证在测量中能得到充分的光强,仪器必须保持一定的狭缝宽度。
测量吸光度:使用分光光度计测量样品溶液在工作波长和参比波长处的吸光度,工作波长下的吸光度主要受目标化合物的浓度影响,而参比波长下的吸光度不受目标化合物浓度的影响。
导致所使用的比色皿不配套,导致在测量较小吸光度时会出现你所说的情况。
1、如果确定所使用的比色皿均为石英比色皿,那么就是所使用的石英比色皿有的没有清洗干净,导致所使用的比色皿不配套,导致在测量较小吸光度时会出现你所说的情况。
2、实验操作不当:在实验过程中,如果操作不当可能导致实验结果异常。例如,在显色反应过程中,试剂加入的顺序、加入的量、反应温度和时间等因素都会影响实验结果。如果操作不当,可能导致显色反应不完全或者生成的邻二氮菲-铁配合物不稳定,从而使吸光度值偏低。
3、当吸光度在0.2-0.8的范围内的时候,读取的读数的误差是最小的。我们在进行实验的时候,可以调整标样和待测样的浓度使其吸收正好落在这一范围内。所以,分光光度计最佳读取范围是吸光度在0.2-0.8的时候。
4、用可见分光光度计测吸光度时出现负值的原因很可能是进行了错误的操作方法,或是顺序错误,或是操作错误,或是器皿不够干净等等,都会造成出现负值的后果。
5、需稍等片刻,等灯热平衡后,重新校正“0”和“100”点,然后再测量。指针式仪器在未接通电源时,电表的指针必须位于零刻度上,不是这种情况,需进行机械调零。比色皿使用完毕后,立即用蒸馏水冲洗干净,并用干净柔软的纱布将水迹擦去,以防止表面光洁度被破坏,影响比色皿的透光率。
1、最大的可能是你用测试组做空白调零了,也就是说你把空白管与测量管的位置放倒了。两比色杯换个位置试试。另一种可能是试剂本身有问题或空白管与测量管试剂加错了。我们的学生在操作考核时,容易犯类似的错误。
2、用可见分光光度计测吸光度时出现负值的原因很可能是进行了错误的操作方法,或是顺序错误,或是操作错误,或是器皿不够干净等等,都会造成出现负值的后果。
3、可能是待测元素低于检出限时,溶液中杂质离子过多,出现负值,可以加掩蔽剂。制作的曲线问题,斜率可能大了,最好小于0.002 。当光线通过某种物质的溶液时透过的光的强度减弱,因为有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被组成此溶液的物质所吸收只有一部分光可透过溶液。
4、吸光度比空白大的为正 比空白小的为负,所以你是负值很正常 如果你想测样品浓度 必须还要做一组标准系列(就是不同浓度的标准液) 把你测样品的浓度包含在你这标准系列浓度范围之内,做出标准曲线就可以计算了。
5、当然,负值还要看负多少呀。如果很负的值,情况有:空白污染了;装空白的比色皿没有擦拭干净。就负一点,情况有:本身杯差造成的;确实没有待测离子,仪器轻微的波动造成的。吸光度是物理学和化学的一个名词。
6、吸光度为负数有两种可能。纯水不纯,含有钙元素,标定误差。 仪器故障或者设定的故障。
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