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不同光度计吸光度不同

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简述信息一览：

DEAE-纤维素为二乙氨乙基纤维素，是阴离子交换剂。基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。离子交换层析中，基质是由带有电荷的树脂或纤维素组成。带有正电荷的称之阴离子交换树脂；而带有负电荷的称之阳离子树脂。离子交换层析同样可以用于蛋白质的分离纯化。

将水分抽干，或用布氏滤斗（内放两层滤纸）过滤，收集湿纤维素，以降低其离子强度。按1ml血清加湿重5g DE52，经过充分搅拌，置4℃吸附1h。上清液可再如此处理一次，即获得较纯的IgG。该法提取IgG简便，既可小量提取，也可大量制备。

（图片来源网络，侵删）

然后建立一个X轴表示单色光波长（或频率）频率，Y轴表示吸光度，将测定所得数据在此坐标上描绘出波长与吸光度地关系的曲线，这就是该样本的吸收曲线。也就是说，反映样本吸光度与通过样本的光波波长关系的一条曲线。每种物质的吸光度曲线是相同的，这是分光光度计的测量基本原理。

受比色皿洁净度和配对性的影响；受参比溶液版选择权的影响；受仪器波长精度的影响；受分光光度计稳定性的影响；受仪器吸光度测定准确性的影响；受检测人员技术水平的影响；受显示溶液配制浓度误差的影响。

分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。它具有灵敏度高、操作简便、快速等优点，是生物化学实验中最常用的实验方法。许多物质的测定都***用分光光度法。

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则：τ=I/I。×100 朗伯-比尔定律的贡献就是发现了透射比的负对数值（也就是吸光度A）的变化与物质的浓度的变化呈正比关系。即：A=-lgτ或lg（I/I。）=KCL 同时，不同的物质对不同波长的单色光呈现出不同的吸光度值，这一变化特征也就是分光光度法用于物质的定性定量分析的理论基础。

原理不同：吸光光度法：是借助分光光度计测定溶液的吸光度，根据朗伯一比耳定律确定物质溶液的浓度。吸光光度法是比较有色溶液对某一波长光的吸收情况。分光光度法：是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法。

在多组分体系中，如果各组分的吸光质点彼此不发生作用，那么吸光度便等于各组分吸光度之和，这一规律称吸光度的加和性。据此可以进行多组分同时测定及某些化学反应平衡常数的测定。

在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。核酸本身物化性质溶解核酸的缓冲液的pH值、离子浓度等在测试时，离子浓度太高也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液（如TE）可大大稳定读数。

调满度后，数据都应该是稳定的，如果不稳定，应检修仪器；如果稳定，再将比色皿加蒸馏水测量，看数据是否稳定，有可能是比色皿使用时间长了被污染了。最后再放入空白或样品，看所测的数据，如果A值大于5，说明样品浓度过高，要稀释了。本身吸光度达到5以上数据的稳定性不太好的。

首先，看你的是神马型号的仪器，是否预热，有些仪器没有预热好波动会比较大；曲线吸光值测出来不好最可能有2个原因：1，你说的可能没消解好，看看消解条件是否达到；最有可能的是使用的药剂不纯，因为我最近也在研究这个问题，国内厂家生产的过硫酸钾大多都不太合格，吸光值会很高。

导致所使用的比色皿不配套，导致在测量较小吸光度时会出现你所说的情况。

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