分光光度计及其分类利用分光光度法或技术工作的仪器叫分光光度计,可分为如下几类: 分光光度计检定(测试)的主要项目对分析结果的影响1)波长准确度分光光度法原理要求照射在样品池上的单色光必须对应于样品吸收光谱中的某一个吸收峰的波长。
紫外分光光度计都自带波长自检功能,其原理是仪器内部利用已设定的氘灯或者钨灯的特征波峰与同样设定波长下波峰做比对,并根据内部设定值做修正。紫外分光光度计,就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。紫外分光光度计可以在紫外可见光区任意选择不同波长的光。
1) 使用前,使用者应该首先了解本仪器的结构和原理,以及各个旋钮之功能。(2) 仪器接地要良好,否则显示数字不稳定。
紫外分光光度计的原理:物质吸收光能:紫外分光光度计的原理基于物质分子吸收光能的现象。当光照射到物质上时,物质分子中的电子会吸收特定波长的光能,导致分子被激发到更高的能级。这种吸收现象会导致透射光的强度减弱,且波长越短,透射光的强度减弱越明显。
物质对光的吸收是具有选择性的,各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱,因此当某单色光通过溶液时,其能量就会被吸收而减弱,光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系,也即符合于比色原理---比耳定律。
紫外可见分光光度计的原理其实相对比较简单,我们都知道就是物质在吸收光谱之后,其本身的含义就是物质里面的分子以及原子有了一定波长光能量。在这些能量的基础上出现分子振动的能级跃迁以及电子能级跃迁这样的效果。每一个物质的分子是不一样的,它们的组成也是相差很大。
分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下,产生了对光吸收的效应,物质对光的吸收是具有选择性的,各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱,因此当某单色光通过溶液时,其能量就会被吸收而减弱,光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系,也即符合于比色原理---比耳定律。
分光光度计的使用方法主要包括开机预热、波长调整、设置测试模式、测试样品等步骤。使用721分光光度计前,首先需要开机预热。这是因为仪器在使用前需要达到稳定的工作状态,预热时间通常为30分钟左右。预热完成后,可以进行波长调整。根据需要测试的样品,选择合适的测试波长,通过波长调整旋钮进行精确设置。
分光光度法的原理是物质与光作用,具有选择吸收的特性。分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方法。它具有灵敏度高、操作简便、快速等优点,是生物化学实验中最常用的实验方法。许多物质的测定都***用分光光度法。
1、有些实验样品可能具有一定的毒性或者腐蚀性,加入盐酸羟胺可能会增加实验操作的风险。为了确保实验操作的安全性,我们可以选择不加入盐酸羟胺进行测量。对于使用分光光度计测量产物纯度的实验,在某些特定情况下,待测液中并不需要加入盐酸羟胺。这取决于实验目的、待测液的性质以及其他干扰因素等多个因素。
2、扫描结束,右侧窗口即可出现光谱图。一般要保持吸光度在0.1~0之间较为合适。如果样品太浓,稀释后再重新测定。调整横轴和纵轴到合适的范围。点击光谱图可查看相关的参数,如:吸收峰等。点击“File”---“Save as”可保存当前的文件。关机 测量完毕,将比色皿从样品池中取出。
3、型分光光度计的使用方法为:检查仪器各调节钮的起始位置是否正确,接通电源开关,打开样品室暗箱盖,使电表指针处于“0”位,预热20min后,再选择须用的单色光波长和相应的放大灵敏度档,用调“0”电位器调整电表为T=0%。
4、应用分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。基本原理分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后,发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。
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