紫外分光光度计的测定方法的简单介绍

文章阐述了关于紫外分光光度计的测定方法，以及的信息，欢迎批评指正。

简述信息一览：

• 1、如何利用紫外分光光度计测定叶绿素的含量?
• 2、如何利用紫外可见分光光度计进行浊度分析?
• 3、紫外分光光度计原理及方法紫外分光光度计原理
• 4、怎样用T6新世纪紫外分光光度计测蛋白质的含量
• 5、紫外可见分光光度计的具体使用方法
• 6、用紫外可见分光光度法测定苯甲酸

如何利用紫外分光光度计测定叶绿素的含量?

注意事项 由于植物子叶中含有水分，故先用纯丙酮进行提取，以色素提取液中丙酮的最终浓度近似80%。由于叶绿素A，B的吸收峰很陡，仪器波长稍有偏差，就会使结果产生很大的误差，因此最好能用波长较正确的高级型分光光度计。

若不到位，将影响到测试值的重复性或准确度。最后，还应保证比色皿的清洁度，延长其使用寿命。2）干燥剂的使用问题。干燥剂失效将导致 a）数显不稳、无法调“0”点或“100%”点（电路或光电管受潮）。b）反射镜发霉或沾污，影响光效率、杂散光增加。

因为分光光度法的要求。测定叶绿素a含量需要利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收多个波长下的吸光值，即可用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量。叶绿素a和叶绿素b在645nm和663nm处有最大吸收，且两吸收曲线相交于652nm处。

如何利用紫外可见分光光度计进行浊度分析?

1、测定水样的吸光度值。 从标准曲线上查找相应的浊度值。 若浊度超过100度，需稀释后测定，并乘上相应的稀释倍数计算。 使用硫酸肼与6-次甲基四胺聚合生成的白色高分子聚合物作为浊度标准溶液。 将标准溶液与水样的浊度进行比较。

2、方法：选用1厘米比色皿（cuvette），在波长660纳米处，测定标准浊度液吸光度值。绘制吸光度—浊度标准曲线，然后测定水样的吸光度值，并从标准曲线上查出相应的浊度。当浊度超过100度时需稀释后测定，计算时应乘上相应的稀释倍数。

3、通常，比色计或分光光度计都可用于比浊分析。也有专门用于比浊分析的仪器，即浊度计或比浊计。***用这种光散射测量技术必须注意：①该法适合于分析混浊度较大的样品，光束通过试样后，透射光强度应有显著减弱。I0与I相差较大，则测量误差较小。

4、导致溶液浊度增加。在给定条件下，溶液的浊度与HPAM浓度之间存在线性关系。当氯气量足以使所有HPAM沉淀时，可以通过测量溶液的浊度来计算HPAM的质量浓度。通过分析吸光度与浓度之间的关系，可以使用分光光度计进行测定。此外，可以通过标准工作曲线或回归直线方程来确定所测溶液中HPAM的浓度。

5、可以设置浊度计，使之在所测浊度值超出安全标准时发出警报。其他方法 浊度也可以通过利用色度计或分光光度计测量样品中颗粒物的阻碍作用造成的透射光强衰减程度来估计。然而，管理机构并不承认这种方法的有效性，这种方法也不符合美国公共卫生协会对浊度的定义。

6、浊度也可以利用比色计或分光光度计等仪器，通过测定光线照射样品时由浊度引起的透射损失而进行估测。但是，这种测定方法不被相应的管理机构认可，其测得的浊度也不符合美国公共卫生组织（APHA）对浊度的定义。能见度测定的结果也会由于色度对光的吸收或颗粒物质对光的吸收等干扰的存在而不够准确。

紫外分光光度计原理及方法紫外分光光度计原理

1、测量的范围不同：（1）紫外分光光度计量程为200nm~600nm间，其中包括部分可见光。（2）可见分光光度计量程为320nm-1100nm，能满足不同物质的测试。所用的灯不同：（1）紫外分光光度计通常用氢灯或氘灯。（2）可见分光光度计通常***用钨灯或卤钨灯。

2、紫外可见分光光度计的原理其实相对比较简单，我们都知道就是物质在吸收光谱之后，其本身的含义就是物质里面的分子以及原子有了一定波长光能量。在这些能量的基础上出现分子振动的能级跃迁以及电子能级跃迁这样的效果。每一个物质的分子是不一样的，它们的组成也是相差很大。

3、紫外-可见分光光度法在190～800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定。当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。

怎样用T6新世纪紫外分光光度计测蛋白质的含量

1、取6支试管，按下表编号并加入BSA（0 mg/mL）0、0、0、0、0、0 mL，用蒸馏水补体积至0 mL；测定A280 ：用第1管为空白对照，各管溶液混匀后在紫外分光光度计上测定吸光度A280，以A280为纵坐标，各管的蛋白质浓度或蛋白质量（mg）为横坐标作图，标准曲线应为直线。

2、配制相应的标准系列； 以空白为参比（或水）测得系列吸光度； 以标准溶液的吸光度为纵坐标，对应的标准溶液的含量为横坐标，找出相对的点； 将点用一条直线连接起来；尽量将点都落在线上；（绘制标准曲线；） 由此根据测得的样品的。

3、仪器设备、试剂旋转蒸发仪（Buchi公司），BP211D电子分析天平（Storis公司），T6普析通用新世纪紫外分光光度计（北京普析），高速冷冻离心机（Backman公司），中药切片机（长沙中南制药机械厂）、中草药粉碎机（天津泰斯特仪器有限公司）。 无水乙醇，丙酮，乙醚，氯仿，正丁醇，浓硫酸，蒽酮，葡萄糖等，以上试剂均为分析纯。

4、光度计会有波动，这是无法避免的。如果你的光度计是2位小数的，可以忽略；如果是3位，0.03就有些偏高。可能是刚开机，仪器不稳定，也可能是两次测量所用比色杯不同造成的的误差。但如果不要求很高的精度，测量值在0.3以上，也可以勉强接受。

紫外可见分光光度计的具体使用方法

要先看你的仪器有没有定性扫描功能了，如果没有就无法实现全波长扫描了。有些仪器通过购买配套的软件也可以实现全波长扫描的。具体操作每个厂家都不一样，但基本需要完成以下内容：设置扫描波长的范围：一般在190-1100nm之间。设置扫描模式：一般选择ABS（吸光度）。

仪器基本使用方法 调节波长旋纽使波长移到所需之处。 四个比色皿，其中一个放入参比试样，其余三个放入代测试样，将比色皿放入样品池内的比色皿架中，夹子夹紧，盖上样品池盖。 将参比试样推入光路，按“MODE”键，使显示？（T）状态或A状态。

第一步，知道你所需要测量物质的特征吸收波长是多少？这个可以在国家标准、行业标准或其他相关标准或方法。例如测量总氮的话，就需要220和275nm这2个波长，所以必须买紫外的光度计，并且最好带双波长测定功能，例如测总磷是6***nm，只需买台可见光度计就可以了。

MC型紫外可见分光光度计是一种多功能、单光束的微机程控型紫外分光光度计，它具有全波段及多波段的波长扫描功能，在检定中，我们常用钬玻璃来作波长的检测。

用紫外可见分光光度法测定苯甲酸

用紫外可见分光光度计可测定物质在紫外光区、可见光区的吸收光谱，并可定量测定。 仪器与试剂仪器 751型分光光度计；1cm石英吸收池一套；50ml容量瓶二只；刻度吸管5ml、10ml各一只；滴管一只。 试剂 苯甲酸标准储备液（1ml相当于0.1mg苯甲酸）；0.1mol/L、0.01mol/L氢氧化钠溶液。

紫外分光光度法是一种常用的分析方法，可以用于测定物质在特定波长范围内的吸光度。在苯甲酸含量的测定中，可以按照以下步骤进行：制备标准溶液：首先，需要制备一系列不同浓度的苯甲酸标准溶液。将不同质量的苯甲酸溶解在已知体积的溶剂中，如无水乙醇或甲醇中，制成一系列不同浓度的苯甲酸溶液。

直接电位法测定溶液PH 首先用已知PH的缓冲液校准酸度计，然后直接测量待测溶液的PH。在碱性条件下，苯甲酸形成苯甲酸盐，对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长在225nm。可***用紫外分光光度计测定物质在紫外光区的吸收光谱并进行定量分析。

加入硫氰酸汞溶液5 ml，振摇，用水稀释至刻度，置20℃水浴中反应15分钟。照紫外-可见分光光度法（在460nm的波长处分别测定溶液A反应液（以溶液B反应液为空白）和标准溶液反应液（以水反应液为空白）的吸光度，溶液A反应液的吸光度不得大于标准溶液反应液的吸光度。

石英比色皿透光面的光学性能非常优秀。机械强度大，适应温度变化强，粘结部非常牢固，内压可耐数个气压。选用优质石英玻璃，确保无气泡，无条纹。耐腐蚀性强，能分别承受6mol/L，6mol/L盐酸，无水乙醇，四氯化碳及苯五种介质浸蚀24小时不脱胶，无渗漏现象。用于在紫外光区域有吸收的物质的测定。

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