散射的影响 当被测物质不均匀,其巾含有微小颗粒物,如悬浮物或胶态粒子等散射质点时,入射光通过该物质就会使部分光被散射而损失,从而减小了透射光的性度,增大了实际吸光度,导敛偏离朗伯一比尔定律。
许多有机化合物在紫外区具有特征的吸收光谱。
物质吸收光能:紫外分光光度计的原理基于物质分子吸收光能的现象。当光照射到物质上时,物质分子中的电子会吸收特定波长的光能,导致分子被激发到更高的能级。这种吸收现象会导致透射光的强度减弱,且波长越短,透射光的强度减弱越明显。
使用紫外分光光度计时应注意:\x0d\x0a1)比色皿架及比色皿在使用中的正确到位问题。有些使用者对这个问题不够重视,因操作不当造成偶然误差,严重影响分析结果。首先,应保证比色皿不倾斜放置。
有机化合物的紫外吸收光谱是指在紫外区域(200-400 nm)的电磁波范围内,有机分子吸收辐射能量时所产生的吸收峰或吸收带图谱。有机分子中的共轭体系或芳香环等结构会对分子的吸收光谱产生影响,而这些影响又可以用来确定分子结构、键长和取代基等信息。
1、紫外可见分光光度计的吸光率的准确度,可以通过多去几次样品测得其值,取其平均值,但是有时候会因为取样原因造成每个值之间相差很大,这就说明了取样的技术与水平决定了结果的重现性。对于测定溶液中的离子,那么准确度和重现性就相对比较高。
2、此时吸光度值与试液浓度一般呈线性关系。吸光度值与测定浓度不成直线关系,发生向下弯曲(负偏离)或向上弯曲(正偏离)的现象而偏离朗伯一比尔定律的主要原因如下。
3、测定物质在设定波长的紫外吸收应呈良好的线性关系,即符合比尔定律,这是定量分析的基础。4)测定应具有良好的准确度,在测定波长有其它物质的干扰、灵敏度较低,溶剂的背景吸收较大导致线性关系变差、选择的样品浓度范围不当,吸收度超过0.3-0.7的范围都会导致准确度下降。5)其它因素。
4、对测量结果有影响的主要因素有:准确度、重复性、杂散光、噪音等。人为的因素也算在内,因为个人操作技术也是有差异的。另外,配件的因素,如比色皿的质量好不好,光源的能量是否减弱等。
5、开机预热、调零 2。待测溶液配制的精准度 3。参比溶液的配制精确度,已知标样的浓度精准度 4。比色皿受光面需要洁净,要润洗 5。根据测定元素不同,光源选择要正确 6。
6、温度和湿度是影响仪器性能的重要因素。他们可以引起机械部件的锈蚀,使金属镜面的光洁度下降,引起仪器机械部分的误差或性能下降;造成光学部件如光栅、反射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀,产生光能不足、杂散光、噪声等,甚至仪器停止工作,从而影响仪器寿命。维护保养时应定期加以校正。
波长准确度:分光光度计的波长准确度对于测定结果的准确性至关重要。由于仪器的制造和调整误差,单色光的实际波长与仪器的波长读数值间可能存在一定的误差。单宁物质在特定波长下有吸收峰,如果仪器的波长准确度不高,那么所测得的数据就会存在误差,从而影响其准确度。
仪器使用要规范:使用分光光度计进行单宁含量的测定时,需要保证仪器的精度和稳定性。在测试过程中,需要定期进行空白试验和标准曲线校准,以确保测试结果的准确性。试剂配制要准确:试剂的配制需要严格按照标准方法进行,确保试剂的质量和浓度准确可靠。同时,试剂瓶需要清洗干净,避免试剂污染。
综上所述,由于不同分光光度计之间存在的技术参数偏差、灵敏度差异、重现性误差以及操作误差等因素的影响,同一试液在不同仪器上测定的吸光度值可能不完全相同。为了获得更准确的测试结果,应尽量使用同一台仪器进行测定,并在使用多台仪器进行比较研究时,确保操作条件和样品处理方式的一致性。
V1为分取试样溶液的体积,mL;V为试样溶液的总体积,mL;m为称取试样的质量,g。注意事项 1)含大量钛时,一次单宁沉淀会夹杂少量钛,影响硫氰酸盐光度法测定铌,用HCl洗涤有机相或用氟化物反萃取消除干扰。2)含大量钨、钼、铝、锡的试样,碱熔后用150g/LNaCl溶液浸取,过滤使与铌、钽分离。
因此如果要生产在2-3年消费,颜色深、果香浓、酒体柔和、单宁含量较多的葡萄酒就应该缩短浸渍时间,一般也就在酒精发酵启动后5-6天,比重在10-15天左右分离,最好的办法是用肉眼观察、比较,并用分光光度计测定其在520mm处吸光值,当酒中色素达到最高值时分离,发酵温度控制在25-27℃为宜。
氧化通常对葡萄酒不利,程度轻微除外。雪利酒和一些餐酒在氧化受控的情况下在橡木桶中陈年从而得到理想的效果。虽然葡萄皮和氧化是葡萄酒颜色的两个主要来源,但鉴定者应了解其他可能影响颜色的因素。简介如下:葡萄品种。某些葡萄品种的果皮色素较浓。
受有色物质稳定性的影响;受比色皿洁净度和配对性的影响;受参比溶液版选择权的影响;受仪器波长精度的影响;受分光光度计稳定性的影响;受仪器吸光度测定准确性的影响;受检测人员技术水平的影响;受显示溶液配制浓度误差的影响。
仪器问题:分光光度计是测定吸光度的重要仪器,如果仪器本身存在问题也可能导致实验结果异常。例如,比色皿的清洁度、仪器波长准确性、光源的稳定性等都可能影响吸光度的测定结果。如果仪器问题导致吸光度测量不准确,则可能使吸光度接近0。
影响吸光度的因素有:溶剂、浓度、温度等等。当溶液的酸度不合适,导致溶液的浓度不稳定,那么光线的偏转角度可能出现较大的误差甚至是偏差。
导致所使用的比色皿不配套,导致在测量较小吸光度时会出现你所说的情况。
所用量器(天平、容量瓶、移液管等)是否存在系统误差 配置显色过程是否误操作(加入试剂顺序、加入量等)显色时间、显色温度是否符合要求 样品槽是否洁净 测试吸光度范围是否在0.2--0.8之间 除此之外,数据处理也会带来误差。
测量吸光度:使用分光光度计测量样品溶液在工作波长和参比波长处的吸光度,工作波长下的吸光度主要受目标化合物的浓度影响,而参比波长下的吸光度不受目标化合物浓度的影响。
设备在存放时,存放的地方要放入一些干燥剂,以免受潮影响使用效果;存放的色皿要注意清洁,清洁时有的部件不允许用手直接擦拭,要注意使用专用的的清洁工具。
在实际操作中,可以通过扫描样品的紫外可见光谱图来确定合适的波长。通过观察光谱图可以找到一个既能使被测物质有较大吸收,又能尽量避免干扰的波长。此外,还可以根据实验目的、样品性质以及文献资料等信息来指导选择合适的入射光波长。
第三,凡含有腐蚀玻璃的物质的溶液,不得长时间盛放在吸收池中。第四,吸收池使用后应立即用水冲洗干净。有色污染可用三摩尔每升盐酸和等体积乙醇的混合液浸泡洗涤。生物样品交替和其他在吸收池光学面上形成薄膜的物质,要使用适当的容剂洗涤。第五,不炉烘上进行加热和上进行加热和烤吸收池。
关于分光光度计使用影响因素,以及分光光度计的影响因素的相关信息分享结束,感谢你的耐心阅读,希望对你有所帮助。