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紫外分光光度计测蛋白质的简单介绍

接下来为大家讲解紫外分光光度计测蛋白质，以及涉及的相关信息，愿对你有所帮助。

简述信息一览：

Bradford法测定bai蛋白质浓度：实验原理。双缩脲法（duBiuret法）和zhiFolin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制dao，促使科学家们去寻找更好的蛋。

凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右，因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量（假设测定物质中的氮全来自蛋白质），即：蛋白质含量=含氮量/16%。

（图片来源网络，侵删）

【答案】：蛋白含量的测定常用的方法有：考马斯亮兰G-250染色法、双缩脲法、福林一酚试剂法、紫外吸收法。（1）考马斯亮兰G-250染色法：考马斯亮兰G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色，在595nm处有最大的光吸收，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

蛋白质的测定都有哪些方法？它们的原理、方法、操作特点、优缺点、适用范围各是什么？①凯氏定氮法原理：蛋白质平均含氮量为16%。

双缩脲法双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。

（图片来源网络，侵删）

每个样本加5mL稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．根据标准曲线计算待测样本的浓度。

考马斯亮蓝染色法的突出优点是：灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质-染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。测定快速、简便，只需加一种试剂。

干扰物质少。如干扰Lowry法的K 、Na 、Mg2 离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。

一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此，制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。

会的。不仅碱性氨基酸，去垢剂，如SDS，还有高浓度的缓冲液都会有影响。而且由于蛋白质酸性，碱性氨基酸含量不同，即使蛋白质浓度相同，所测出的值也会不同。

紫外分光光度法测定蛋白质含量实验方法如下：实验部分仪器与试剂：La***echUVPOWER紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250；牛血清蛋白；超纯水。试液的制备：牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。

如果测定的是无色未知化合物，就不能用普通光学玻璃比色皿测定吸收曲线。原因是：普通光学玻璃比色皿对紫外光源有强吸收。如果测定的是有色未知化合物，就能用普通光学玻璃比色皿测定吸收曲线。

不能用玻璃比色皿是因为紫外线的玻璃的透射能力很低（玻璃吸收紫外光能力强），所以一般***用透射能力强的石英比色皿。

先看看使用的比色皿是不是石英比色皿，在紫外范围内应使用石英比色皿，不能用玻璃比色皿，因为玻璃能吸收紫外光。

石英比色皿可用在全波段，玻璃比色皿只能用于340nm以上波长，因为玻璃不透紫外光。玻璃在200~400nm对紫外有强吸收而且这个吸收大到无法校正（这个是关键问题，做一个背景吸收，再做一次空白样就知道了）石英比色皿在全波段都没有非常强烈的吸收，不过用紫外光谱的时候，使用石英比色皿要注意方向。

紫外线的波长很短，能量高，但是穿透性很低，普通的玻璃就可以将它完全阻隔。我们在实验室用“紫外分光光度计”测试样品的紫外吸收峰的时候用的比色皿必须是石英的，不能是普通玻璃，因为普通玻璃会阻隔紫外线，石英不会！“可见分光光度计”的光源是可见光，用的比色皿才能是普通玻璃。

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