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Bradford法测定bai蛋白质浓度:实验原理。双缩脲法(duBiuret法)和zhiFolin—酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制dao,促使科学家们去寻找更好的蛋。
凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右,因此,通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量(假设测定物质中的氮全来自蛋白质),即: 蛋白质含量=含氮量/16%。
【答案】:蛋白含量的测定常用的方法有:考马斯亮兰G-250染色法、双缩脲法、福林一酚试剂法、紫外吸收法。(1)考马斯亮兰G-250染色法:考马斯亮兰G-250在酸性溶液中为棕红色,当它与蛋白质结合后变为蓝色,在595nm处有最大的光吸收,其颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
蛋白质的测定都有哪些方法?它们的原理、方法、 操作特点、优缺点、适用范围各是什么?①凯氏定氮法 原理:蛋白质平均含氮量为16%。
双缩脲法 双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法,硫铵不干扰显色, Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成紫蓝色络合物,此物在540nm波长处有最大吸收。
每个样本加5mL稀释的染料结合溶液,作用5~30min。染液与蛋白质结合后,将由红色变为蓝色,在595nm波长下测定其吸光度。注意,显色反应不得超过30min. 根据标准曲线计算待测样本的浓度。
考马斯亮蓝染色法的突出优点是:灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。测定快速、简便,只需加一种试剂。
干扰物质少。如干扰Lowry法的K 、Na 、Mg2 离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。
一般用分光光度法测物质的含量,先要制作标准曲线,然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此,制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。
会的。不仅碱性氨基酸,去垢剂,如SDS,还有高浓度的缓冲液都会有影响。而且由于蛋白质酸性,碱性氨基酸含量不同,即使蛋白质浓度相同,所测出的值也会不同。
紫外分光光度法测定蛋白质含量实验方法如下:实验部分 仪器与试剂:La***echUVPOWER紫外分光光度计;玻璃比色皿一套;考马斯亮蓝G250;牛血清蛋白;超纯水。试液的制备:牛血清蛋白标准溶液(1000ug/ml)的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中,加入超纯水溶解并定容。
如果测定的是无色未知化合物,就不能用普通光学玻璃比色皿测定 吸收曲线。原因是:普通光学玻璃比色皿对紫外光源有强吸收。如果测定的是有色未知化合物,就能用普通光学玻璃比色皿测定 吸收曲线。
不能用玻璃比色皿是因为紫外线的玻璃的透射能力很低(玻璃吸收紫外光能力强),所以一般***用透射能力强的石英比色皿。
紫外分光光度法测定蛋白质含量实验方法如下:实验部分 仪器与试剂:La***echUVPOWER紫外分光光度计;玻璃比色皿一套;考马斯亮蓝G250;牛血清蛋白;超纯水。试液的制备:牛血清蛋白标准溶液(1000ug/ml)的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中,加入超纯水溶解并定容。
先看看使用的比色皿是不是石英比色皿,在紫外范围内应使用石英比色皿,不能用玻璃比色皿,因为玻璃能吸收紫外光。
石英比色皿可用在全波段,玻璃比色皿只能用于340nm以上波长,因为玻璃不透紫外光。玻璃在200~400nm对紫外有强吸收 而且这个吸收大到无法校正(这个是关键问题,做一个背景吸收,再做一次空白样就知道了) 石英比色皿在全波段都没有非常强烈的吸收,不过用紫外光谱的时候,使用石英比色皿要注意方向。
紫外线的波长很短,能量高,但是穿透性很低,普通的玻璃就可以将它完全阻隔。我们在实验室用“紫外分光光度计”测试样品的紫外吸收峰的时候用的比色皿必须是石英的,不能是普通玻璃,因为普通玻璃会阻隔紫外线,石英不会!“可见分光光度计”的光源是可见光,用的比色皿才能是普通玻璃。
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