接下来为大家讲解荧光分光光度计的检测条件,以及荧光分光光度计的检测器涉及的相关信息,愿对你有所帮助。
不考虑光源和检测器的优劣,就单色器条件的限制,荧光计相当于一个固定波长条件下的荧光分光光度计。如果考虑光源和检测器的优劣,它还是一个性能不佳的光度计。现在,问题就好解释了。荧光计只能测定某一特定波长条件下的荧光强度。
精准与高效:光谱技术聚酯薄膜与金属镀膜反射镜,研究表面特性;激光拉曼光谱检测,深入材料结构分析,非破坏性测量,快速而准确。荧光与荧光分光光度计用于材料和生物化学研究,以其多光束系列和高灵敏度为特点。紫外分光光度计是实验室中的常规工具,适用于物质鉴定和化合物结构推测。
其能提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度、量子产率、荧光寿命、荧光偏振等许多物理参数,从各个角度反映了分子的成键和结构情况。通过对这些参数的测定, 不但可以做一般的定量分析, 而且还可以推断分子在各种环境下的构象变化, 从而阐明分子结构与功能之间的关系。
1、影响荧光分光光度法定量测定的主要因素 1.激发光照射 有一些荧光物质若受到强光照射,会发生分解而导致F↓。所以,荧光分光光度计通常在激发光单色器后装配有光闸,在测定时才打开光闸让激发光照射样品池。2.温度 温度↑,荧光效率下降,F↓。因为,温度↑,增加分子间碰撞机会而使能量消耗掉。
2、辐射与物质的非吸收作用引起的误差;荧光与光化学反应的影响,一般说来,荧光对分光光度测量产生的误差可以忽略,多数情况下显色体系的荧光效率很小,而且荧光发射是各向同性,只有一小部分沿着透射光方向进入检测器,使测量吸光度偏低,产生负偏离。
3、当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时,物质在一定浓度范围内,其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系,可以用作定量分析。
荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高,但浓度太大的溶液会有“自熄灭”作用,以及由于在液面附近溶液会吸收激发光,使发射光强度下降,导致发射光强度与浓度不成正比,故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。
不同点:吸光光度法是由分子对辐射能选择性吸收由基态或较低能级跃迁到较高能级产生的分子光谱,是分子吸收光谱;而荧光分析法是由分子对辐射能选择性吸收由基态跃迁到单重激发态,当由其第一激发单重态的最低振动能级回到基态各振动能级间的跃迁所产生的分子光谱,是分子发射光谱。
原理不同:(1)紫外分光光度计,就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。(2)荧光分光光度法是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定。可根据不同的物质其组成与结构调整所吸收的紫外-可见光波长和发射光的波长。
原子荧光光谱法是以原子在辐射能激发下发射的荧光强度进行定量分析的发射光谱分析法。但所用仪器与原子吸收光谱法相近。原子荧光光谱的产生:气态自由原子吸收特征辐射后跃迁到较高能级,然后又跃迁回到基态或较低能级。同时发射出与原激发辐射波长相同或不同的辐射即原子荧光。
X射线荧光光谱法,即X射线发射光谱法,是一种非破坏性的仪器分析方法。为了区别不同宝玉石的成分,常***用两种X荧光分光技术:(1)波长色散光谱法:通过分光晶体对不同波长的X荧光进行衍射而达到分光的目的,然后用探测器探测不同波长处的荧光强度。
中药的化学成分复杂,有效成分难以确定,仅单方制剂亦为一多种成分的混合物,因此要求更严格和更先进的分离、分析手段进行鉴别和含量测定。
它的光路有两套分光系统,分别的激发和发射光分光系统,光传播方向是互垂直的.绘制谱图方法:激发波长不变,以发射波长进行扫描;发射波长不变,以激发波长进行扫描.要到最佳激发波长和发射波长,都要做这两种扫描。
荧光分光光度计的基本原理是:由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中,激发样品中的荧光物质发出荧光,荧光经过滤过和反射后,被光电倍增管所接受,然后以图或数字的形式显示出来。
荧光激发光谱:在一定波长光激发下,材料所发射的荧光的能量随其波长变化的关系。荧光素的激发光谱不需要测吧?如果真想测,通常有两个办法:目前的酶标仪都能测一个物质的吸收光谱,即激发光谱;另外可以用荧光分光光度计测定。
紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。① 浓度测定A260下读值为1表示40 μg RNA/ml。样品RNA浓度(μg/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 μg/ml。
荧光分光光度计,科学探索的得力助手,它在众多科研领域中大放异彩。这款精密仪器的工作原理与应用,堪称实验分析的瑰宝。让我们深入剖析它的每一个关键组件,感受其在食品安全、环境保护等领域的深远影响。
物质的激发光谱和荧光发射光谱,可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时,物质在一定浓度范围内,其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系,可以用作定量分析。
不同点:荧光光度计***用垂直的计量方式,在与激发光垂直的方向测量荧光以消除透射光的影响。荧光光度计有两个单色器,一个是激发单色器,置于液槽前,用于获得单色性较好的激发光;另一个是发射单色器,置于液槽和检测器之间,用于分出某一波长的荧光,消除其它杂散光干扰。
影响荧光分光光度法定量测定的主要因素 1.激发光照射 有一些荧光物质若受到强光照射,会发生分解而导致F↓。所以,荧光分光光度计通常在激发光单色器后装配有光闸,在测定时才打开光闸让激发光照射样品池。2.温度 温度↑,荧光效率下降,F↓。因为,温度↑,增加分子间碰撞机会而使能量消耗掉。
两种方法的区别如下:荧光分光光度计有两个单色器,而一般紫外可见分光光度计只有一个单色器。荧光分光光度计的光源和检测器是成直角分布的,而紫外可见分光光度计是成一条直线的。
关于荧光分光光度计的检测条件,以及荧光分光光度计的检测器的相关信息分享结束,感谢你的耐心阅读,希望对你有所帮助。
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