取6支试管,按下表编号并加入BSA(0 mg/mL)0、0、0、0、0、0 mL,用蒸馏水补体积至0 mL;测定A280 :用第1管为空白对照,各管溶液混匀后在紫外分光光度计上测定吸光度A280,以A280为纵坐标,各管的蛋白质浓度或蛋白质量(mg)为横坐标作图,标准曲线应为直线。
配制相应的标准系列; 以空白为参比(或水)测得系列吸光度; 以标准溶液的吸光度为纵坐标,对应的标准溶液的含量为横坐标,找出相对的点; 将点用一条直线连接起来;尽量将点都落在线上;(绘制标准曲线;) 由此根据测得的样品的。
光度计会有波动,这是无法避免的。如果你的光度计是2位小数的,可以忽略;如果是3位,0.03就有些偏高。可能是刚开机,仪器不稳定,也可能是两次测量所用比色杯不同造成的的误差。但如果不要求很高的精度,测量值在0.3以上,也可以勉强接受。
收获附子先用自来水清洗干净,在用蒸馏水漂洗两次,装入牛皮纸袋放入烘箱,在105℃下烘30 min,再在60~70℃下烘干至恒重,粉碎过60目筛,4℃冰箱保存,备用。
当菌悬液的麦氏浊度为0.5时,细菌浓度相当于510CFU每ml。细菌菌悬液OD值和麦氏浊度的换算根据美国CLSI推荐的方法,将菌液调整至OD6250.08至0.13之间,相当于0.5麦氏浊度。
在分光光度计上测定OD值:以生理盐水作为空白对照调零,测定稀释20倍的菌液的吸光度,若OD值在0.3-0.7的范围内,则按照1OD=0×109CFU/ml计算原始菌液浓度。若OD值大于0.7且小于1,则取原始菌液进行40倍稀释后测定吸光度值。
我们实验室里也用分光光度计测细菌浓度,这是一种方便有效的方法。通常挑取一到两个单菌落放入1ml生理盐水中,光度计的波长调为625nm,吸光度为0.08~0.1之间时为0.5Mc浓度,相当于5×10^8CFU/ml。
1、调零调100,然后测标准溶液和样品,我记得先后顺序没什么影响,但一般都是先测标准再测样品,3,调零,调一百就行了,不需要用标准溶液的。由朗伯比尔定律A=abc,用调零和调100可以防止背景吸收,可以直接用分光光度计测量。
2、如果显示不到“100”,则可适当增加电流放大器灵敏度档数,但应尽可能使用低档数,这样仪器将有更高的稳定性。当改变灵敏度 后必须重新校正“0”和“100”。
3、先调零,再把东西放进去测。但是貌似浓度太低测不准。
4、预热后,按(3)连续几次调整“0”和“100%”,紫外分光光度计即可进行测定工作。吸光度的测量:按(3)调整仪器的“00.0”和“100%”后,将选择开关置于“A”,调节吸光度调零旋钮,使数字显示为“000” ,然后将被测样品移入光路,显示值即为被测样品的吸光度值。
纯净的样品比值大于8(DNA)或者0(RNA)。如果比值低于8 或者0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度,A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物、多肽、苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于0 。A280是蛋白质的吸光度。
图 核酸、蛋白质吸光度谱 260/230、260/280 纯度好的DNA或RNA,在pH7-5下:A260 / A280比值应大于8(DNA)或者0(RNA)。如果比值低于8 或者0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。较纯净的核酸A260/A230的比值一般在8-2之间。
A260/A230比值低,意味着什么?A260/A230值正常区间约为0或高于0;如落于此区间外,属于比值异常,意味着提取的DNA中有胍盐或有机物污染。比值偏低 1)蛋白去除不干净:增加蛋白沉淀离心的次数;2)杂质去除不干净:洗脱之前,核酸吸附柱中尽可能不要残留液体,可增加空离心次数和时间。
如果比值低于8 或者0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品,A320一般是0。
1、紫外可见分光光度法分析腌菜中亚硝酸盐含量时,需要在538nm处测吸光度。具体测量步骤如下:准备标准溶液和腌菜样品。在紫外可见分光光度计上设置波长为538nm,并进行空白校正。分别在紫外可见分光光度计的样品槽中放入标准溶液和腌菜样品,测量吸光度。
2、度分别为 0.00、0.00.0.80、00、60mg/l 的亚硝酸盐工作溶 液, 再加入一粒显色试剂,振摇至试剂全部溶解,10min 即显色且其稳 定性至少为 5 小时,然后用相机拍下不同浓度值的颜色,制作比色卡。
3、样品制备:将待测样品中的亚硝酸盐与酸性条件下的苯酚类化合物进行偶联反应,生成偶氮化合物。根据样品的特性,选择合适的萘酚类化合物和酸性条件,并进行样品的预处理。确保样品中没有干扰物质的存在。 建立标准曲线:根据所选用的萘酚类化合物,在一定浓度范围内制备一系列标准溶液。
关于分光光度计测浓度多少,以及分光光度计测浓度公式的相关信息分享结束,感谢你的耐心阅读,希望对你有所帮助。