光度标定
简述信息一览：
吸光度标准曲线的绘制
1、就可以通过比较样品吸光度和标准曲线来确定样品的浓度。可以将样品吸光度代入标准曲线中，找到对应的浓度值，从而确定样品的浓度。总之，绘制标准曲线需要进行制备标准溶液、测定吸光度、绘制标准曲线和确定样品浓度等步骤。通过绘制标准曲线，可以更准确地测定样品浓度，从而更好地分析实验数据和结果。
2、点击插入，选择图表中的散点图。在出现的图表框中右击出现菜单，选择“选择数据”。在出现的对话框后，移动鼠标选择要的这两行数，然后确定。这一样，图表上就有一些点点了。然后在图表上移到有点的地方右键。在出来的菜单中选择添加趋势线。利用曲线求出吸光度相对应的浓度。
3、配制相应的标准系列，以空白为参比（或水）测得系列吸光度，以标准溶液的吸光度为纵坐标，对应的标准溶液的含量为横坐标，找出相对的点，将点用一条直线连接起来，尽量将点都落在线上，由此根据测得的样品的吸光度查找相对的含量。
紫外分光光度计定量测定没有标准样品
1、题主是否想询问“紫外分光光度计定量测定没有标准样品该怎么操作”？首先，预热仪器，同时配制待测样品对应的标准样（用高纯度试剂配制）。其次，待测样预处理。然后，先根据国标或推荐检测方法测标准样的吸光度，测待测样的吸光度。
2、在T6分光光度计上，不使用标准品来直接测定样品的浓度和标准量是不可行的。原因如下：分光光度计的测量原理是基于朗伯-比尔定律（Lambert-Beers Law），该定律表示溶液的吸光度（A）与溶液的浓度（C）和液层厚度（L）之间的乘积成正比。即：A = ε × C × L。
3、首先单击“定量测定”。其次在“测量”中选择“参数设置“。最后输入测量参数及样品信息，点击“确定”即可。
4、根据朗伯-比尔定律计算出样品溶液的浓度。根据浓度和已知的标准曲线，可以推断出样品的组成和含量。总之，紫外-可见分光光度法定性和定量分析的依据是光谱吸收定律和朗伯-比尔定律。通过测量样品在不同波长下的吸光度和液层厚度，可以确定样品的特征波长和浓度，从而推断出样品的组成和含量。
5、启航：开机与预热首先，打开仪器，确保样品室中没有遮挡物，如有则移除。开启电源，仪器进入预热模式，耐心等待20分钟，让内部元件充分热稳定。选择光源的魔力对于紫外-可见分光光度计，预热结束后，电源打开，钨灯即亮起。
6、而分光光度法则是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析。 常用的波长范围为：（1）200～400nm的紫外光区，（2）400～760nm的可见光区，（3）5～25μm（按波数计为4000cm-1～400cm-1）的红外光区。
考马斯亮蓝法测定蛋白质标准曲线
试剂：考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G一250100mg溶于50ml95%乙醇，加入100ml85%H；PO4，加蒸馏水稀释至 1000ml滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G-250.7%（W/V）乙醇，5%（W/V）HPO4。
凯氏定氮法 双缩脲法 Folin-酚试剂法 紫外吸收法 考马斯亮蓝法 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量—标准曲线制作 （一）、试剂： 考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml，滤纸过滤。
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰（lmax）的位置，由465nm变为 595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。步骤 制作标准曲线取7支试管，按下表平行操作。
标准曲线是根据测量结果自己算出来的，没有固定公式。考马斯亮蓝法 也称考马斯蓝染色法（coomassie blue staining）又称Bradford法，是 Bradford 于 1***6 年建立起来的一种蛋白质浓度的测定方法。由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。
制作蛋白质标准曲线是为了学习考马斯亮蓝（CoomassieBrilliantBlue）法测定蛋白质浓度的原理和方法。制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。一般用分光光度法测物质的含量，先要制作标准曲线，然后根据标准曲线查出所测物质的含量。
将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。
做分光光度计标准曲线检测时,分光光度计只有三个比色皿
先调0和100。不上比色皿的时候将分光光度计透光度调为0；将比色皿倒入空白对照后对准光路调100。此后的实验就不需要调节了。然依次加入标准曲线的液体测分光光度，从低浓度向高浓度加，就是加一个测完之后倒了再加另一个，由于测的是同一种溶液，因此不需要用水润洗。
所使用的比色皿可能有的是石英比色皿，有的错用为玻璃比色皿，可能会导致该问题。这是因为，石英比色皿对紫外光是完全透过，而玻璃比色皿对紫外光是完全吸收。
肯定有影响了。如果比色皿不干净，这个肯定是影响测量数据的，不多说；如果测样的时候使用两个比色皿，最好在测试之前将两个比色皿校正一下，也就是清零，这样可以消除因比色皿不一致带来的误差，如果不经过事先校正，可能会将比色皿之间的误差带入结果。这个对测微量或者痕量物质时影响较大。
如果是在可见光区使用选玻璃。如果在紫外光区使用选用石英的，长短根据样品的浓度选择。要能控制读数在0.2-0.8之间就可以。普通硅酸盐光学玻璃制成，能用于350~1000nm的可见区，比色皿应与光度计配套使用，一般有5~50mm的根据实验需要选型。
理论上不会！国标法中用的是标准曲线法，计算浓度的时候，比色皿厚度没有纳入公式中。
可见分光光度计开机，开机前，检查电源插座是否接上；按“GO TO λ”键，输入设定波长；四个比色皿，其中R位置放置参比试样，其余三个放入待测试样。
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