荧光光度计和荧光分光光度计

简述信息一览：

• 1、荧光分光光度计原理
• 2、紫外分光光度计在280nm处是最大吸收波长怎么设置区间
• 3、荧光分光光度计怎么测定荧光强度?
• 4、紫外分光光度计中光谱扫描在280nm的ABS为1.161,这说明蛋白质含量高还...
• 5、能否用荧光计代替荧光分光光度计?
• 6、荧光分光光度计与紫外分光光度计有何区别?用荧光分光度法的检测方法可...

荧光分光光度计原理

1、荧光分光光度计也具有双单色器，可以记录物质的激发光谱和荧光光谱，***用计算机完成仪器的系统控制和数据***集。

2、范围：适用于F-4600荧光分光光度计 职责：质量管理部检验中心、研发部化验员负责本规程的执行。质量管理部、研发部负责人负责本规程实施情况的监督检查。内容：1 仪器组成 荧光分光光度计，荧光池，配套系统，计算机，打印机。

3、荧光分光光度计是测样品发射出的荧光的，而紫外分光光度计测的是样品的吸收。荧光分光光度计用一束光（激发光）穿过样品的溶液，然后检测样品发射出来的荧光。荧光波长总是比激发波长更长。为了防止激发光对检测的干扰，检测器与光源是垂直的。

4、荧光剂的工作原理是光源氙弧灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以及激发光单色器变成单色光后，此光即为荧光物质的激发光，被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光，经过单色器变成单色荧光后照射于测样品用的光电倍增管上，由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪。

5、可以大大地降低激发光对荧光的影响，由光源（高压汞灯或氙灯）发出的紫外光和蓝紫光经单色器（滤光片）处理后特定波长的光照射到样品池中，激发样品中的荧光物质而发出荧光，荧光经过滤过和反射后，光信号被光电倍增管放大后，然后以图或数字的形式在控制软件上显示出来。

紫外分光光度计在280nm处是最大吸收波长怎么设置区间

紫外吸收峰的选择应该根据实验需要和样品特性来确定，紫外吸收峰的选择应该满足以下几个条件：选择合适的波长范围：根据样品的特性和实验需要，选择合适的波长范围进行测量。常用的紫外吸收波长范围为200-400nm，其中260nm和280nm是常用的测量波长。

原因：由于蛋白质中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在，所以大多数蛋白质在280nm波长处有特征的最大吸收。例如：色氨酸的吸收峰是280nm（吲哚环）。可用于测定0.1～0.5mg/mL含量的蛋白质溶液。

在波长为190-400nm范围内进行扫描，均在205nm左右处有最大吸收峰，因此，选定205nm为检测波长。校正曲线线性浓度范围试验用硝酸钾配制质量浓度ρ9（NO3-N）为0.1-0mg/L的标准系列溶液，用1cm比色皿，在波长205nm处，以水为参比，将紫外分光光度计的吸光度调整到零后，依次测定吸光度。

紫外-可见分光光度法在190～800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定。当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。

氧、二氧化碳和水所吸收，因此只能在真空中进行研究工作，故这个区域的吸收光谱称真空紫外。波长在200～380 nm称为近紫外区，一般的紫外光谱是指这一区域的吸收光谱。波长在400～750 nm范围的称为可见光谱。常用的分光光度计一般包括紫外及可见两部分，波长在200～800 nm（或200～1000 nm）。

高温环境、仪器附近有阳光直射、非预期的震动：改善环境以适应仪器正常使用。 在紫外波段使用玻璃比色皿：使用正确的比色皿。 样品的挥发性太大：使用比色皿盖。 光源灯老化：更换 源灯。 前置放大板损坏：修理或者更换。

荧光分光光度计怎么测定荧光强度?

选择合适的测量参数，设置λex、λem，***用定点读数或扫描方式，即可测得所选波长处的荧光强度。

水样中石油经石油醚或环己烷萃取，于选定的激发光照射下，测定发射荧光的强度定量。本法最低检出质量为0.0025mg。若取250mL水样测定，检测下限为0.01mg/L。仪器 荧光分光光度计。分液漏斗1000mL。试剂 氯化钠。

当测绘荧光激发光谱时，将荧光单色器的光栅固定在最适当的荧光波长处，只让激发光单色口的凸轮转动，将各波长的激发光的强度讯号输出至记录仪，所记录的光谱即激发光谱（emission spectrum）。

如果该物质的浓度不同，它所发射的荧光强度就不同，测量物质的荧光强度可对其进行定量测定。荧光分析法的特点是灵敏度高、选择性好、样品用量少和操作简便。

选择荧光的激发光波长至关重要，它决定了荧光强度的最大化。通过Stokes位移，我们理解发射光谱通常比激发光谱波长长，这一特性在荧光分析中扮演着关键角色。接下来，让我们探讨荧光分光光度计的构造——精密的四部分组合：激发光源、样品池、双单色器系统和检测器。

将环己烷层从分液漏斗口到入1cm比色皿中，在荧光分光光度计上，以376nm为激发波长，520nm为发射波长，环己烷为参比，测定硒的荧光强度Ii。以荧光强度Ii-I0（标准空白）为纵坐标，相应硒含量（μg）为横坐标绘制校准曲线。

紫外分光光度计中光谱扫描在280nm的ABS为1.161,这说明蛋白质含量高还...

二）DNA纯度检测及含量计算DNA浓度用紫外分光光度计测定，核酸的光吸收值位于波长260nm处，蛋白质则位于280nm，分别测定后，其OD260/OD280的比值应大于7低于此值，说明DNA中仍残留较多的蛋白质，此时可用酚、氯仿继续抽提纯化。若比值大于9表明DNA链破坏，断裂严重，已成为小分子，因此操作应轻柔。

由此可见， 光谱带宽的重要性。但是， 在实际工作中， 有不少科技工作者不太重视光谱带宽问题； 如某制药厂***用光谱带宽为5nm 的进口紫外可见分光光度计作为质检仪器。而各国药典规定用于药品检验的仪器进行药品检验， 其测试误差为3%。而药典规定要求很多药品检验的分析误差在1%以内， 显然不符合要求。

在碱性条件下，蛋白质中的巯基和酚基等可将Cu2+还原成Cu+， Cu+能定量地与Folin－酚试剂反应生成蓝色物质，600nm比色测定蛋白质含量。灵敏度较高（约 0.1 mg），但较麻烦，也会受 硫酸铵 及 硫醇化合物 的干扰。 步骤中各项试剂的混合，要特别注意均匀澈底，否则会有大误差。

四种紫外吸收法： 280nm的光吸收法 用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白（BSA）。

实验结束后将比色皿中的溶液倒尽，然后用蒸馏水或有机溶剂冲洗比色皿至干净，倒立晾干。关电源将干燥剂放入样品室内，盖上防尘罩，做好使用登记，得到管理老师认可方可离开。紫外可见分光光度计问题处理：如果仪器不能初始化，关机重启。

能否用荧光计代替荧光分光光度计?

原理不同：（1）紫外分光光度计，就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。（2）荧光分光光度法是根据物质的荧光谱线位置及其强度进行物质鉴定和含量测定。可根据不同的物质其组成与结构调整所吸收的紫外-可见光波长和发射光的波长。

荧光分析中，双单色器系统至关重要。激发单色器滤除无关光波，而荧光单色器则确保只有特定波长的荧光通过，有效减少干扰。滤光片荧光计虽经济，但光谱解析能力有限；而现代分光光度计***用光栅分光，提供更高的光谱纯度和分析深度。样品池的选择，精准无误 样品池需选用低荧光材料，如石英，以减少散射干扰。

荧光光谱检测的是样品从电子激发态跃迁回到电子基态的过程。仪器构造：紫外可见分光光度计***用是双光路构造，激发光源被分束镜分为两束，一路经过待测样品，一路经过参比样。两束光的光经过单色仪分光然后进入检测器测量光强。最后传送到计算机进行数据处理。

荧光分光光度计与紫外分光光度计有何区别?用荧光分光度法的检测方法可...

1、与标准物及标准图谱对照等。荧光分光光度法的灵敏度通常***光光度法高2？3个数量级。在卫生检验、环境及食品分析、药物分析、生化和临床检测等方面有着广泛的应用。所用灯不同：紫外光区通常用氢灯或氘灯。荧光分光光度法通常用钨灯或卤钨灯。

2、　　紫外分光光度计测的是分子在紫外光区的吸收强度，荧光分光光度计测的是吸收光能量后处于激发态的分子发出的辐射（即分子荧光）。

3、紫外分光光度计测的是分子在紫外光区的吸收强度，荧光分光光度计测的是吸收光能量后处于激发态的分子发出的辐射（即分子荧光）。

关于荧光光度计f-280，以及荧光光度计和荧光分光光度计的相关信息分享结束，感谢你的耐心阅读，希望对你有所帮助。