mse光度计公司

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简述信息一览：

• 1、双酶切体系一般怎么优化

双酶切体系一般怎么优化

1、体系不管多大，都有相应的buffer，只要将buffer变为1X工作浓度就行了，两个同时切的话，需要注意酶的量，看单位是多少，一般是1ul的酶切1ug的质粒或者其它DNA序列，尽量酶的体积不能超过体系的10%，因为里面含有甘油，可能会影响酶切效率。

2、解决这个问题的方法就是加大原始酶切反应体系中的质粒的浓度或者电泳时提高上样量。接着，还有一种可能就是两种酶的酶切效率相差甚远，一种酶活性非常好，一种酶则活性很弱，这样就会产生看不到酶切片段的情况。

3、分步酶切 如果找不到一种可以同时适合两种酶的缓冲液，就只能***用分步酶切。分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始，酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求，然后加入第二种酶完成双酶切反应。

4、如果DNA提取质量高，没有蛋白污染，那么过夜没问题，否则也不建议超长时间酶切；用多少质粒不是看体积，只要100ng就看得见，先定量质粒。做双酶切，如果2个片段都不太小，那么用200ng的质粒保证可以看见。你的质粒DNA加太多了 所以酶切体系可以改改，减少DNA和酶的量，减少时间。

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