分光光度计测蛋白质波长

本篇文章给大家分享分光光度计测蛋白质波长，以及分光光度计测定蛋白浓度对应的知识点，希望对各位有所帮助。

简述信息一览：

• 1、分光光度计测定蛋白质含量的依据是?
• 2、怎样用T6新世纪紫外分光光度计测蛋白质的含量
• 3、生物化学的题型:蛋白质的最大紫外吸收峰为什么是280nm?
• 4、蛋白质对紫外线的吸收是在510
• 5、如何使用普析T6分光光度计测某蛋白质液体最大吸收峰的吸光度?
• 6、蛋白质浓度测定方法

分光光度计测定蛋白质含量的依据是?

大多数蛋白质在280nm波长处有特征的最大吸收，这是由于蛋白质中有酪氨酸，色氨酸和苯丙氨酸存在的缘故，因此，利用这个特异性吸收，可以计算蛋白质的含量。如果没有干扰物质的存在，在280nm处的吸收可用于测定0.1～0.5mg/ml含量的蛋白质溶液。

参与蛋白质组成的20种氨基酸中色氨酸（Trp）、酪氨酸（Tyr）和苯丙氨酸（Phe）的R基团中含有苯环共轭双键系统，在紫外光区（220-300nm）显示特征的吸收谱带，最大光吸收（max）分别为2727和259nm。由于大多数蛋白质都含有这些氨基酸残基，因此用紫外分光光度法可测定蛋白质含量。

bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。

怎样用T6新世纪紫外分光光度计测蛋白质的含量

1、紫外分光光度法测定蛋白质含量实验方法如下：实验部分 仪器与试剂：La***echUVPOWER紫外分光光度计；玻璃比色皿一套；考马斯亮蓝G250；牛血清蛋白；超纯水。试液的制备：牛血清蛋白标准溶液（1000ug/ml）的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中，加入超纯水溶解并定容。

2、nm的光吸收法 用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白（BSA）。280 nm和260 nm的吸收差法 核酸对紫外光有很强的吸收，在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍（每克），但核酸在260 nm处的吸收更强，其吸收高峰在260 nm附近。

3、稀释血清（或其他蛋白质溶液），准确吸取0.1mL血清，置于50mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度（即500倍）。测定光密度在紫外分光光度计上，将稀释的蛋白质溶液倒入石英比色杯中，用生理盐水做对照，测得280nm和260nm两个波长的光密度。

4、利用分光光度计测定蛋白浓度需要先进行蛋白浓度标准曲线绘制。

生物化学的题型:蛋白质的最大紫外吸收峰为什么是280nm?

1、一是由于其含色氨酸残基和酪氨酸残基，其分子内部存在着共轭双键，在280nm处有一吸收峰；二是因肽键存在而引起的，在200～220nm处有一吸收峰。此两处吸收峰都可用于蛋白质的定量测定，但以前者为常用。

2、由于蛋白质分子中含有色氨酸和酪氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰，即最大吸收波长，可作蛋白质定量测定。

3、最大吸收波长是280nm。蛋白质在280nm波长处是最大吸收，这是由于蛋白质中有酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸存在的缘故，利用这个特异性吸收计算蛋白质的含量。

4、【答案】：D 色氨酸和酪氨酸在280nm波长处有最大光吸收，大多数蛋白质含有这两种氨基酸，故分析溶液中蛋白质含量可用紫外吸收法，蛋白质的最大吸收波长是280nm。

5、峰高就是蛋白质在280nm处的吸收峰值，因为蛋白质在紫外280nm处有吸收，所以会用紫外280nm检测蛋白质。然后这个图谱里面的峰型还是不错的，估计你的目标蛋白应该在Fraction20~23的样子。

蛋白质对紫外线的吸收是在510

【答案】：错误注意光吸收和吸收峰含义不同。蛋白质在200～400nm近紫外区均有吸收，只是吸收峰大多在280mn左右。具体到每一种氨基酸其最高吸收峰还是有区别的，如Tyr在275nm，Phe在257mn。

绝大多数蛋白在415nm处没有吸收峰 蛋白质分子中含有酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸等残基，它们的结构中具有共轭双键，对紫外光有吸收作用，其最大值在280nm波长处。当然也有些结构异常的蛋白可能会有例外，比如氨基酸Tyr 是275nm，Phe是257nm，如果含有大量Phe的蛋白质可能吸收峰最大值就不是280nm了。

nm。蛋白质具有紫外吸收的特性是因为有芳香氨基酸残基，芳香氨基酸的R基含有苯环共轭π键系统。其中色氨酸，酪氨酸以及苯丙氨都属于芳香氨基酸，它们具有紫外吸收特性，蛋白质吸收紫外光能力的大小，主要取决于芳香族氨基酸的含量。

如何使用普析T6分光光度计测某蛋白质液体最大吸收峰的吸光度?

一，在测量方法上 如果是标准曲线的基体和样品的基体大致相同的情况，用标准曲线法：首先配制一系列浓度的所测物质的标准溶液，用分光光度计测的吸光度A值，作出标准曲线（最好估测所测物质的浓度，使标准曲线包含这个浓度），再测出样品的A值，由标准曲线求出其浓度。

nm的光吸收法 用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白（BSA）。280 nm和260 nm的吸收差法 核酸对紫外光有很强的吸收，在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍（每克），但核酸在260 nm处的吸收更强，其吸收高峰在260 nm附近。

分光光度计定量的基础是光吸收定律：A=KcL或者A=εcL，及是根据溶液对光的吸收程度来定量的。如果比色皿中存在气泡，气泡会对光有一个折射作用，这同样会导致通过溶液后的光强减弱，吸光度增加，致使测量的浓度变大。

蛋白质浓度测定方法

1、蛋白质浓度的测定方法有： 双缩脲法：双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。

2、【答案】：蛋白含量的测定常用的方法有：考马斯亮兰G-250染色法、双缩脲法、福林一酚试剂法、紫外吸收法。（1）考马斯亮兰G-250染色法：考马斯亮兰G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质结合后变为蓝色，在595nm处有最大的光吸收，其颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

3、利用lambert-beer定律进行蛋白质定量分析，有4种测定方法。详细论述如下：吸光度法（Absorbance Method）：这是一种最常用的蛋白质定量方法，通过测量溶液在特定波长下的吸光度来计算蛋白质浓度。吸光度与溶液中的蛋白质浓度成正比，因此可以通过已知的蛋白质吸光系数和稀释倍数来计算蛋白质浓度。

关于分光光度计测蛋白质波长，以及分光光度计测定蛋白浓度的相关信息分享结束，感谢你的耐心阅读，希望对你有所帮助。