本篇文章给大家分享分光光度计测蛋白质波长,以及分光光度计测定蛋白浓度对应的知识点,希望对各位有所帮助。
大多数蛋白质在280nm波长处有特征的最大吸收,这是由于蛋白质中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在的缘故,因此,利用这个特异性吸收,可以计算蛋白质的含量。如果没有干扰物质的存在,在280nm处的吸收可用于测定0.1~0.5mg/ml含量的蛋白质溶液。
参与蛋白质组成的20种氨基酸中色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)的R基团中含有苯环共轭双键系统,在紫外光区(220-300nm)显示特征的吸收谱带,最大光吸收(max)分别为2727和259nm。由于大多数蛋白质都含有这些氨基酸残基,因此用紫外分光光度法可测定蛋白质含量。
bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色,用分光光度计在吸光度595nm处读数,通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线,再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。不利因素主要是特殊蛋白的结构,缓冲液组分中有干扰试剂等。
1、紫外分光光度法测定蛋白质含量实验方法如下:实验部分 仪器与试剂:La***echUVPOWER紫外分光光度计;玻璃比色皿一套;考马斯亮蓝G250;牛血清蛋白;超纯水。试液的制备:牛血清蛋白标准溶液(1000ug/ml)的制备称取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中,加入超纯水溶解并定容。
2、nm的光吸收法 用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(BSA)。280 nm和260 nm的吸收差法 核酸对紫外光有很强的吸收,在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克),但核酸在260 nm处的吸收更强,其吸收高峰在260 nm附近。
3、稀释血清(或其他蛋白质溶液),准确吸取0.1mL血清,置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度(即500倍)。测定光密度在紫外分光光度计上,将稀释的蛋白质溶液倒入石英比色杯中,用生理盐水做对照,测得280nm和260nm两个波长的光密度。
4、利用分光光度计测定蛋白浓度需要先进行蛋白浓度标准曲线绘制。
1、一是由于其含色氨酸残基和酪氨酸残基,其分子内部存在着共轭双键,在280nm处有一吸收峰;二是因肽键存在而引起的,在200~220nm处有一吸收峰。此两处吸收峰都可用于蛋白质的定量测定,但以前者为常用。
2、由于蛋白质分子中含有色氨酸和酪氨酸,因此在280nm波长处有特征性吸收峰,即最大吸收波长,可作蛋白质定量测定。
3、最大吸收波长是280nm。蛋白质在280nm波长处是最大吸收,这是由于蛋白质中有酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸存在的缘故,利用这个特异性吸收计算蛋白质的含量。
4、【答案】:D 色氨酸和酪氨酸在280nm波长处有最大光吸收,大多数蛋白质含有这两种氨基酸,故分析溶液中蛋白质含量可用紫外吸收法,蛋白质的最大吸收波长是280nm。
5、峰高就是蛋白质在280nm处的吸收峰值,因为蛋白质在紫外280nm处有吸收,所以会用紫外280nm检测蛋白质。然后这个图谱里面的峰型还是不错的,估计你的目标蛋白应该在Fraction20~23的样子。
【答案】:错误注意光吸收和吸收峰含义不同。蛋白质在200~400nm近紫外区均有吸收,只是吸收峰大多在280mn左右。具体到每一种氨基酸其最高吸收峰还是有区别的,如Tyr在275nm,Phe在257mn。
绝大多数蛋白在415nm处没有吸收峰 蛋白质分子中含有酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸等残基,它们的结构中具有共轭双键,对紫外光有吸收作用,其最大值在280nm波长处。当然也有些结构异常的蛋白可能会有例外,比如氨基酸Tyr 是275nm,Phe是257nm,如果含有大量Phe的蛋白质可能吸收峰最大值就不是280nm了。
nm。蛋白质具有紫外吸收的特性是因为有芳香氨基酸残基,芳香氨基酸的R基含有苯环共轭π键系统。其中色氨酸,酪氨酸以及苯丙氨都属于芳香氨基酸,它们具有紫外吸收特性,蛋白质吸收紫外光能力的大小,主要取决于芳香族氨基酸的含量。
一,在测量方法上 如果是标准曲线的基体和样品的基体大致相同的情况,用标准曲线法:首先配制一系列浓度的所测物质的标准溶液,用分光光度计测的吸光度A值,作出标准曲线(最好估测所测物质的浓度,使标准曲线包含这个浓度),再测出样品的A值,由标准曲线求出其浓度。
nm的光吸收法 用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(BSA)。280 nm和260 nm的吸收差法 核酸对紫外光有很强的吸收,在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克),但核酸在260 nm处的吸收更强,其吸收高峰在260 nm附近。
分光光度计定量的基础是光吸收定律:A=KcL或者A=εcL,及是根据溶液对光的吸收程度来定量的。如果比色皿中存在气泡,气泡会对光有一个折射作用,这同样会导致通过溶液后的光强减弱,吸光度增加,致使测量的浓度变大。
1、蛋白质浓度的测定方法有: 双缩脲法:双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法,硫铵不干扰显色, Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成紫蓝色络合物,此物在540nm波长处有最大吸收。双缩脲法常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白质溶液测定。
2、【答案】:蛋白含量的测定常用的方法有:考马斯亮兰G-250染色法、双缩脲法、福林一酚试剂法、紫外吸收法。(1)考马斯亮兰G-250染色法:考马斯亮兰G-250在酸性溶液中为棕红色,当它与蛋白质结合后变为蓝色,在595nm处有最大的光吸收,其颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
3、利用lambert-beer定律进行蛋白质定量分析,有4种测定方法。详细论述如下:吸光度法(Absorbance Method):这是一种最常用的蛋白质定量方法,通过测量溶液在特定波长下的吸光度来计算蛋白质浓度。吸光度与溶液中的蛋白质浓度成正比,因此可以通过已知的蛋白质吸光系数和稀释倍数来计算蛋白质浓度。
关于分光光度计测蛋白质波长,以及分光光度计测定蛋白浓度的相关信息分享结束,感谢你的耐心阅读,希望对你有所帮助。
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