紫外测定蛋白质浓度

本篇文章给大家分享紫外光度计测定蛋白质，以及紫外测定蛋白质浓度对应的知识点，希望对各位有所帮助。

简述信息一览：

• 1、怎样用T6新世纪紫外分光光度计测蛋白质的含量
• 2、紫外光谱能不能检测蛋白质
• 3、生物化学实验紫外法测定蛋白质含量中哪些不良操作会对实验结果产生影响...
• 4、紫外吸收法测定蛋白质含量
• 5、elisa检测波长是多少

怎样用T6新世纪紫外分光光度计测蛋白质的含量

1、取6支试管分别标号，前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，不加标准蛋白溶液，每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致。将液体混合均匀，在室温下放置30分钟，以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照，于650nm波长处测定各管中溶液的吸光度值。

2、凯氏定氮法的理论基础是蛋白质中的含氮量通常占其总质量的16%左右（12%~一19%），因此，通过测定物质中的含氮量便可估算出物质中的总蛋白质含量（假设测定物质中的氮全来自蛋白质），即： 蛋白质含量=含氮量/16%。

3、***用紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验原理：（1）蛋白质可作定量分析的原因：蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，所以蛋白质溶液在275 280nm具有一个吸收紫外吸收高峰。在一定浓度范围内，蛋白质溶液在最大吸收波长处的吸光度与其浓度成正比，服从朗伯-比耳定律，因此可作定量分析。

4、实验操作：取双缩脲试剂、10mg/mL的标准蛋白溶液和待测蛋白溶液（稀释10倍的人血清），按下表配制6支溶液：紫外吸收测定法目的要求：了解紫外吸收法测定蛋白质含量的原理。掌握紫外分光光度计的使用方法。

5、目前食品中蛋白质的测定方法有蛋白质自动分析仪，近红外自动测定仪，紫外分光光度法以及凯氏定氮法等。本文***用纳氏试剂作为显色剂测定食品中蛋白质含量，适用范围广，可用于各类食品及保健食品的检测。用本法对标准品、质控样品进行测定获得满意结果，对批量样品的快速测定更具有实用性。

紫外光谱能不能检测蛋白质

此外，蛋白质溶液在238nm的光吸收值与肽键含量成正比。利用一定波长下，蛋白质溶液的光吸收值与蛋白质浓度的正比关系，可以进行蛋白质含量的测定。紫外吸收法简便、灵敏、快速，不消耗样品，测定后仍能回收使用。

这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。

测定蛋白质浓度是实验室中经常进行的一个分析操作，可以用于生物学、医学等领域。波长在此过程中起到了非常重要的作用，因为不同波长的吸光度与蛋白质的含量是有一定关系的。下面将从蛋白质吸收光谱和波长选择两个方面详细解答测定蛋白质浓度的波长问题。

四种紫外吸收法： 280nm的光吸收法 用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白（BSA）。

紫外吸收法测定蛋白质含量的优点：简便、灵敏、快速，不破坏蛋白质也不消耗样品，测定后仍能回收使用。低浓度的盐不干扰测定，如生化制备中常用的硫酸铵和大多数缓冲液等。特别适用于柱层析洗脱液的快速连续检测，因为此时只需测定蛋白质浓度的变化，而不需知道其绝对值。

双缩脲法（duBiuret法）和zhiFolin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制dao，促使科学家们去寻找更好的蛋。取6支试管分别标号，前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液，最后一支试管加待测蛋白质溶液，不加标准蛋白溶液，每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致。

生物化学实验紫外法测定蛋白质含量中哪些不良操作会对实验结果产生影响...

1、g/mL氢氧化钠溶液，再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。若先加入硫酸铜溶液，再加入氢氧化钠溶液，则无法充分制造碱性环境，此时硫酸铜会与氢氧化钠发生复分解反应，生成蓝色氢氧化铜沉淀，导致现象不清，无法较好地达到实验目的。蛋白质浓度：双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。

2、紫外吸收法测定蛋白质浓度的基本原理是：蛋白质分子中的芳香氨基酸残基（主要是色氨酸和酪氨酸）和一些其他的结构元素可以吸收紫外光（特别是在280nm附近的波长）。当紫外光通过含有蛋白质的溶液时，蛋白质分子会吸收部分紫外光。通过测量溶液的吸光度（Absorbance，A），可以评估蛋白质的浓度。

3、因此每一个检验者应明确的了解，在检验过程中的每一个环节，每个空间，每个操作，每个工具及材料，没灭菌者都是带菌者，都会对检验结果产生不确定影响，因而应牢固的建立无菌观念。

4、Folin法的原理 （1）在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质—铜络合物。（2）此络合物将试剂磷钼酸—磷钨酸（Folin试剂）还原，混合物呈深蓝色（磷钼蓝和磷钨蓝混合物），颜色深浅与蛋白质含量成正比。

5、核酸对紫外光的最大吸收凤位于260nm处，而蛋白质位于280nm处，260nm的吸收仅为核酸的1/10，因此蛋白质含量较底时对实验影响不大；当样品中蛋白质含量较高时，将样品移至试管中，加入一定量稀盐溶液，用玻璃棒小心搅拌，使蛋白质沉淀，滴加少量25%SDS溶液，边加边轻轻搅拌。

6、紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。

紫外吸收法测定蛋白质含量

1、测定蛋白质含量的方法有：凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、紫外吸收法、考马斯亮蓝法等。凯氏定氮法 凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。

2、四种紫外吸收法： 280nm的光吸收法 用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白（BSA）。

3、实验原理：大多数蛋白质分子结构中含有芳香族氨基酸（酪氨酸和色氨酸）残基，使蛋白质在280nm的紫外光区产生最大吸收，并且这一波长范围内的吸收值与蛋白质浓度的成正比，利用这一特性可定量测定蛋白质的含量。

elisa检测波长是多少

做NFkB的ELISA，450nm处测的吸光度得A450值 最后还要用蛋白含量作为内参统一各样本的蛋白量。

.01-00质检是比较正常的。高于0一般说明浓度太高需要再稀释。

可以的，TMB底物显色后，吸光峰值在450nm，另外的校准波长是防止气泡等杂质造成的干扰设置，避开450左右50nm以上即可。两次读取的OD值，用OD450 - OD校准波长即可。

关于紫外光度计测定蛋白质和紫外测定蛋白质浓度的介绍到此就结束了，感谢你花时间阅读本站内容，更多关于紫外测定蛋白质浓度、紫外光度计测定蛋白质的信息别忘了在本站搜索。